Knowledge Base #03

Deep Purple™ Staining

※ 過去のDNR社資料のアーカイブ

Deep Purple™ について

生物学の研究が複雑な新しい時代に発展するにつれ、現在の方法を改善するためにたえず新しい技術が求められています。蛍光分野の技術開発により、感度の高い新しいアッセイの作成が可能になり、実験の定量化が向上しました。

エピココノン化合物をベースにした Deep Purple™ 色素は、epicoccum nigrum 菌からの天然化合物です。エピココノンは、一級アミンおよびNH3とほぼ瞬時に反応して、赤色蛍光化合物を生成する非蛍光性のアザフィロンです。この化合物は長いストークスシフト (> 100nm) を持ち、水中で弱い蛍光を発し、タンパク質で 610nm の強い蛍光を発します。このエピココノン蛍光スペクトルには、蛍光スペクトルを超えない励起ピークがあり、SDS-PAGEおよび2色蛍光のアプリケーション (フルオレセイン) でこの色素を使用できます。タンパク質に結合したSDSの親油性尾部との疎水性相互作用によると考えられるエピココノン結合メカニズムは、SYPRO Orange およびタンジェリン色素で使用されるメカニズムと類似しています。

エピココノンには、生物学において優れた蛍光色素であるといういくつかの特徴があります。
これらの特性のいくつかには、卓越した感度、質量分析の互換性、使いやすさ、環境への配慮、さまざまなpH条件下でのタンパク質への付加物の安定性、および自己消光に対する耐性が含まれます。これらの利点は、多色染色やタンパク質検出から、細胞内の特定のタンパク質や分子ビーコンの標識まで、幅広いアプリケーションを開きます。

DNR社は、Deep Purple™ 色素を迅速、正確、再現性のある方法で簡単に検出できる独自のバイオイメージングシステムを開発しました。当社の優れたGelCaptureソフトウェアとカメラは、最高帯域強度と最低帯域強度の両方を検出できます。

測定

Deep Purple™ Total Protein Stainは、365nm と 520nm の二重ピーク励起スペクトルを持ち、610nm に蛍光のピークがあります。

Deep Purple™ のスペクトル

測定のヒント

DeepPurple™色素は、励起にL520nm + L525nm または 360nm UV 透過照明を使用し、測定側にに赤色フィルターを使用することで最もよく検出されます。この色素を検出する方法はいくつかあり、ユーザーは実験の仕様とバイオイメージングシステムにあわせて実験の最終的なパラメーターを選択する必要があります。F-ChemiBIS 6 Pro Bio-ImagingシステムでのDeep Purple™ 色素検出の一般的なパラメータは次のとおりです。

撮影画像

このDNR社が撮影したDeep Purple™ の画像は、F-ChemiBIS 6 Pro バイオイメージングシステムとSDS PAGE 12% ゲルおよび Deep Purple™ Total Protein Stain、アマシャムバイオサイエンスカタログ番号 PRN6305 を使用して撮影されました。サンプルはPrecision Plus Standard Catalog No. #161-0373、BioRad です。

参考文献

  • Bell, P.J. L.; Karuso, P. “Epicocconone, A Novel Fluorescent Compound from the Fungus Epicoccum nigrum” J. AM. CHEM. SOC. 2003, 125, 9304-9305.
  • Coghlan, D.R.; Mackintosh, J.A.; Karuso, P. “Mechanism of Reversible Fluorescent Staining of Protein with Epicocconone” Org lett. 2005, 7(12), 2401-2404.
  • Mackintosh, J.A.; Choi, H.-Y.; Bae, S.-H.; Veal, D.A.; Bell, P.J.; Ferrari, B.C.; Van Dyk, D.D.; Verrills, N.M.; Paik, Y.-K.; Karuso, P. “A fluorescent natural product for ultra sensitive detection of proteins in one-dimensional and twodimensional gel electrophoresis” Proteomics 2003, 3, 2273–2288.
  • Smejkal, G.B.; Robinson, M.H.; Lazarev, A. ” Comparison of fluorescent stains: Relative photostability and differential staining of proteins in two-dimensional gels” Electrophoresis 2004, 25, 2511–2519.

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