タンパク質染色は、タンパク質とマトリックスによる染色の異なる結合に基づいています。効率的な染色の主な特徴は、高感度、低バックグラウンド、広い直線性、そして使いやすさです。特定の色素の感度は、そのタンパク質の検出の線形範囲を決定する吸光係数と結合力に依存します。

SDS-PAGEで一般的に使用されているクマシーブリリアントブルーは、ドイツの科学者Volker Neuhoffによって最初に文献に記述されました。この色素の名前は、アフリカのガーナ中央部の都市であるクマシKumasi（クマシ）（旧Coomassie・クーマシー）に由来しています。

現在、クマシー色素にはR-250とG-250の2種類があります。一般的に使用されているのはクマシーR-250で、感度が高いものです。クマシーG-250は感度は劣りますが、迅速で便利な染色手順を作成できる特性があります。染色反応では、クマシー色素は、ファンデルワールス力によりスルホン酸基と正のタンパク質アミン基の間のイオン相互作用を介してタンパク質に結合します。

DNR社はクマシーブリリアントブルー色素を迅速、正確、再現性のある方法で簡単に検出できる独自のバイオイメージングシステムを開発しました。当社の優れたGelCaptureソフトウェアとカメラにより、ユーザーは最高帯域強度と最低帯域強度の両方を検出できます。

測定

色素がタンパク質に結合すると、色素のピーク吸光度にシフトが生じます。未結合のクマシーブルーは、波長 465 nmで最大に光を吸収しますが、色素がタンパク質に結合している場合、吸収の最大値は 595 nmになります。

タンパク質と結合したクマシ―ブリリアントブルーのスペクトル

測定のヒント

クマシーブリリアントブルー色素は、470nmの励起LEDと、発光用のUVハイフィルター(従来の低白色光の代わりに)を使用することで最も効率よく検出されます。この色素を検出する方法はいくつかあり、ユーザーは実験の仕様とバイオイメージングシステムにあわせて実験の最終的なパラメーターを選択する必要があります。 F-ChemiBIS 6 Pro Bio-Imagingシステムでのクマシーブリ リアントブルー色素検出の一般的なパラメータは次のとおりです。

撮影画像

このDNR社が撮影したクマシーブリリアントブルーの画像は、F-ChemiBIS 6 Pro バイオイメージングシステムとグラジエントSDS PAGE4 15％ ゲルおよびクマシーブリリアントブルー-R、シグマアルドリッチカタログ番号 B8647 を使用して撮影されました。サンプルはE.Coli 細胞溶解物からのヒト MEK1 タンパク質の抽出物です。

参考文献

• Blakesley, R.W.; Boezi , J.A . “A new Staining Technique for Proteins in Polyacrylamide Gels Using Coomassie Brilliant Blue G250,” Anal Biochem 1977, 82 (2), 580-582.
• Syrovy, L.; Hodny, Z. “Staining and Quantification of Proteins Separated by Polyacrylamide Gel Electrophoresis,”. J. Chromatog. 1991, 569, 175- 196.
• Tal,M.; Silberstein , A.; Nusser , E. “Why Does Coomassie Brilliant Blue R Interact differently with different proteins?,” The Journal of Biological Chemistry 1985, 260 (18), 9976-9980.
• Volker N.; Reinhard S.; Hansjörg E. “Clear Background and Highly Sensitive Protein Staining with Coomassie Blue Dyes in Polyacrylamide Gels: A Systematic Analysis,” Electrophoresis . 1985, 6(9), 427-448.