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試薬・消耗品
UltraScript® Reverse Transcriptase & cDNA Synthesis Kits
UltraScript® Reverse Transcriptase & cDNA Synthesis Kits
耐熱性 MMLV 逆転写酵素・cDNA 合成キット
UltraScript® Reverse Transcriptase は、cDNA 合成速度と収量を向上させ、正確な転写表現を実現するように設計された、堅牢で耐熱性に優れた改良型 MMLV 逆転写酵素です。ウイルス RNA 配列の高感度逆転写を可能にし、RT-qPCR ベースの検出テストの理想的なコンポーネントとなります。
主な特長
- 偏りのない表現：5’ および 3’ mRNA 転写末端の偏りのない表現。RNase H 活性も低減。
- 耐熱性逆転写酵素：45 °C ～ 55 °C で反応可能。高度な RNase 阻害剤をブレンド。
- 高収量・高感度：わずか 4 pg の総 RNA から高い cDNA 収量を実現し、低コピー数の転写も高感度に検出。
- GC リッチ対応：Mg および dNTP を含む高度なバッファー化学で、GC リッチテンプレートも正確に逆転写。
- 柔軟なラインナップ：プレミックスまたは個別のオリゴ cDNA 合成キットが利用可能。
仕様
| 製品 | UltraScript® cDNA Synthesis Kit |
|---|---|
| 構成（25 Reactions） | 20x UltraScript for cDNA Synthesis 1 × 25 μL、5x cDNA Synthesis Mix 1 × 100 μL |
| 構成（100 Reactions） | 20x UltraScript for cDNA Synthesis 1 × 100 μL、5x cDNA Synthesis Mix 4 × 100 μL |
| 製品 | UltraScript® cDNA Synthesis Kit Separate Oligos |
| 構成（25 Reactions） | 20x UltraScript for cDNA Synthesis 1 × 25 μL、5x UltraScript Buffer 1 × 200 μL、100 μM Anchored Oligo(dT)18 1 × 100 μL、100 μM Random Hexamers 1 × 100 μL |
| 構成（100 Reactions） | 20x UltraScript for cDNA Synthesis 1 × 100 μL、5x UltraScript Buffer 2 × 200 μL、100 μM Anchored Oligo(dT)18 1 × 100 μL、100 μM Random Hexamers 1 × 100 μL |
| 製品 | UltraScript® Reverse Transcriptase |
| 構成（10,000 Units） | UltraScript (200u/μL) with RNase inhibitor 2 × 25 μL、5x UltraScript Buffer 1 × 200 μL |
| 構成（40,000 Units） | UltraScript (200u/μL) with RNase inhibitor 2 × 100 μL、5x UltraScript Buffer 4 × 200 μL |
| 製品 | UltraScript® Reverse Transcriptase (2500 U/μL) |
| 構成（50,000 Units） | UltraScript Reverse Transcriptase (2500 U/μL) with RNase Inhibitor 1 × 20 μL、Glycerol-Free Enzyme Dilution Buffer 1 × 1.5 mL |
| 製品 | UltraScript® Reverse Transcriptase (8000 U/μL) |
| 構成（80,000 Units） | UltraScript Reverse Transcriptase (8000 U/μL) 1 × 10 μL、Glycerol-Free Enzyme Dilution Buffer 1 × 1.5 mL |
| 保管 | 到着後、製品は -30 °C ～ -20 °C で保管する必要があります。正しく保管すれば、キットは指定された有効期限まで完全な活性を維持します。 |
製品詳細
UltraScript® Reverse Transcriptase は、cDNA 合成速度と収量を向上させ、正確な転写表現を実現するように設計された、堅牢で耐熱性に優れた改良型 MMLV 逆転写酵素です。
この酵素はウイルス RNA 配列の高感度逆転写を可能にするため、RT-qPCR ベースの検出テストの理想的なコンポーネントとなります。スタンドアロン酵素として、または逆転写酵素、バッファー システム、およびオプションでアンカー オリゴ (dT) プライマーを含むランダム ヘキサマーの最適化されたブレンドを含むレディ ミックスとしてご利用いただけます。この逆転写酵素は、幅広い RNA テンプレート濃度にわたって、偏りのない、効率的で感度の高い cDNA 合成を提供します。
アプリケーション
- ランダム ヘキサマー、オリゴ (dT)、遺伝子特異的プライマー
- リアルタイム PCR 分析用の cDNA 合成
- PCR 分析、クローニング、ライブラリ作成、次世代シーケンシング用の cDNA 合成
- コピー数が少ない転写産物
- ウイルス RNA ターゲット
- miRNA ターゲット
- 全 RNA またはポリ (A)+ RNA からの効率的な合成
UltraScript® Reverse Transcriptase とは？
UltraScript® Reverse Transcriptase は、cDNA 合成用の熱安定性が高く非常に活性の高い修飾 MMLV 逆転写酵素 (RTase) です。反応温度は 55 °C まで上げることができ、高い二次構造を持つ GC リッチ RNA 領域のより高い特異性と効率的な転写が可能になります。RTase には、RNase の混入による RNA の分解を防ぐ高度な RNase 阻害剤がブレンドされています。UltraScript® Reverse Transcriptase はリボソーム RNA やトランスファー RNA によって阻害されないため、トータル RNA が理想的な基質になります。
この酵素には、わずか 4 pg の RNA から高収率の cDNA を生成するように最適化された、Mg、dNTP、安定化剤およびエンハンサーを含む 5x バッファーが付属しています。オリゴが含まれていないため、UltraScript® Reverse Transcriptase は、必要な分析の種類に応じてユーザーが独自のプライミング戦略を定義できる利便性と柔軟性を提供します。UltraScript® Reverse Transcriptase は、遺伝子特異的プライマー、オリゴ (dT)、ランダム ヘキサマーを使用して優れたパフォーマンスを発揮し、さまざまな下流アプリケーションに最適な高品質の cDNA を生成します。
PCR Biosytems 社の強力な RTase は、高濃度フォーマットでも、既製の UltraScript® cDNA Synthesis Kit (旧称 qPCRBIO cDNA Synthesis Kit ) としても利用できます。ランダム ヘキサマーとアンカー オリゴ (dT) の相対濃度は、リアルタイム PCR 実験で使用する cDNA の生成用に最適化されています。これにより、プライミング戦略、逆転写酵素、バッファー、エンハンサーなどの重要な逆転写反応因子をユーザーが最適化する必要がなくなり、偏りのない、効率的かつ高感度な cDNA 合成が毎回得られます。
参考データ１：55 °C までの耐熱性酵素
UltraScript® Reverse Transcriptase の熱安定性は、Sypro Orange 蛍光アッセイを使用して測定しました。タンパク質を Sypro Orange 色素とともにインキュベートし、温度を徐々に上昇させます。タンパク質が展開するにつれて蛍光強度が増し、融点はタンパク質の 50% が展開される温度です。DSF 曲線は、UltraScript® Reverse Transcriptase (紫) と 0.1 mg/ml の野生型 MMLV RT (黒) を示しています。この実験は、UltraScript® Reverse Transcriptase が野生型酵素より 9.3 °C 高い 54.9 ± 0.3 °C で展開することを示しており、この酵素がより熱安定性が高く、反応中に活性を維持する可能性が高いことを示しています。
参考データ２：高収量のcDNAの生成
マウス肝臓から採取した全RNA 100 ngから、UltraScript® Reverse Transcriptase (紫) と競合製品のミックス (青) を使用してcDNAを作成しました。プライマーとして5 μM オリゴdT(18) と5 μM ランダムヘキサマーを加えました。反応物を 42 °C で 10 分間インキュベートしました。得られた cDNA を qPCRBIO SyGreen®Mix を使用して定量しました。UltraScript® Reverse Transcriptase は、同じ時間で競合製品の10倍以上のcDNAを作成しました。
参考データ３：広い逆転写ダイナミックレンジ
UltraScript® cDNA Synthesis Kit を使用して、マウスの総 RNA を 40 pg から 400 ng まで 10 倍連続希釈して cDNA を合成しました。qPCR は、マウス ACTG 遺伝子の 122 bp フラグメントを増幅する qPCRBIO SyGreen®Mix を使用して実行されました。テストした範囲全体で効率は 96% と測定されました。
参考データ４：広い逆転写ダイナミックレンジ
a) UltraScript® cDNA Synthesis Kit を使用して、マウス肝臓の全 RNA から cDNA を合成しました。4.2 kb のマウス CANX 転写産物の 5’ (ピンク色のトレース) および 3’ (灰色のトレース) 末端に対して 2 つのプライマーペアが設計されました。qPCRBIO SyGreen®Mix を使用して分析を行いました。プライマーペアは 4 kb 離れており、逆転写バイアスは示されなかったため、増幅トレースは重複しています。
b) RNS18 遺伝子 (1.8 kb) の 5’ (ピンク) および 3’ (灰色) トレースに対する 2 つのプライマーペア。この場合も、逆転写バイアスは見られませんでした。
参考データ５：高GC%のための耐熱性酵素
a) UltraScript® cDNA Synthesis Kit を使用して、42 ℃ (ピンク) および 55 ℃ (灰色) でマウス肝臓のトータル RNA から cDNA を合成しました。プライマー ペアは GJB2 に対して設計され、84% GC アンプリコンを生成しました。qPCRBIO SyGreen®Mix を分析に使用しました。高温でのインキュベーションでは、低温でのインキュベーションよりも GC リッチな cDNA が生成されました。
b) GAPDH からの 55% GC のコントロール アンプリコンは、上記の 2 つの cDNA から増幅されました。この GC% では、高温でのインキュベーションによる利点は得られませんでした。温度が高くなると、収量はわずかに低下しました。
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以下の資料を、ご入力いただいたメールアドレス宛にダウンロードリンク（有効期限72時間）でお送りします。
- 取扱説明書：UltraScript cDNA Synthesis Kit
- 取扱説明書：UltraScript Reverse Transcriptase
- 取扱説明書：UltraScript cDNA Synthesis Kit Separate Oligos
- MSDS（安全データシート）：UltraScript cDNA Synthesis Kit
- MSDS（安全データシート）：UltraScript Reverse Transcriptase
- MSDS（安全データシート）：UltraScript cDNA Synthesis Kit Separate Oligos