PCRBIO HS Taq DNA Polymerase & Mixes

ハイスループットの自動反応セットアップのためのホットスタートアッセイが必要な場合でも、コピー数の少ないテンプレートの検出が必要な場合でも、PCR Biosystems 社はお客様のニーズを満たす堅牢な業界最先端の酵素を提供します。

特長

• 低コピー数テンプレートの比類のない検出のためのホット スタート テクノロジー
• 最大 6kb のアンプリコンによる PCR 成功率の向上
• 極めて低いバックグラウンド DNA
• GC および AT リッチ配列を含む複雑なテンプレートからの効率的な特異的増幅
• 高速および標準的なサイクリング条件の両方で高いパフォーマンスを発揮
• 既存のサーマルサイクラーで PCR スループットを向上

アプリケーション

• ジェノタイピング
• ハイスループット PCR
• 標準および高速 PCR
• ルーチンおよびマルチプレックス PCR
• TAクローニング
• 細菌培養物、血液、尿からの直接の阻害剤耐性 PCR
• コロニーPCR
• 「難しい」PCR – GC および AT リッチ DNA

PCRBIO HS Taq DNA Polymerase とは？

PCRBIO HS Taq DNA Polymerase は、高速、高特異性、高感度の PCR のために設計された高度な抗体媒介ホットスタート酵素です。ポリメラーゼ技術と緩衝液化学の最新の開発により、PCR 速度、収量、特異性が向上し、GC と AT リッチの配列の両方を含む幅広いテンプレートで一貫して高いパフォーマンスが得られます。

独自の抗体は、95℃での最初の活性化ステップまでポリメラーゼ活性を阻害し、プライマーダイマーと非特異的産物の形成を防止し、他の方法と比較して特異性と感度が向上します。酵素とバッファー システムにより、哺乳類のゲノム DNA などの複雑なテンプレートで優れた PCR パフォーマンスが得られます。高スループットのホット スタート アッセイ、自動反応セットアップ、または低コピー数テンプレートの検出が必要な場合でも、PCR Biosystems 社はお客様のニーズを満たす堅牢な業界最先端の酵素を提供します。

PCRBIO HS Taq DNA Polymerase は、プライマーとテンプレートを除くすべての反応成分が含まれた、すぐに使用できる便利な 2x ミックスとしてもご利用いただけます。PCRBIO HS Taq Mix Red には、直接ゲルにロードするための事前にロードされた赤色色素が含まれています。

参考データ１：ターゲットテンプレート5pgまでの高感度増幅

1kb フラグメント (GAPDH 遺伝子) の PCR 増幅は、マウスゲノム DNA の 10 倍希釈系列 (5000、500、50、5pg) と PCRBIO HS Taq DNA ポリメラーゼ (紫) および対応する競合他社のホット スタート Taq ポリメラーゼを使用して実行されました。反応はマスター ミックス フォーマットを使用してセットアップされ、メーカーの推奨事項 (NEB (オレンジ)、Promega (黄色)、Thermo (赤)) に従いました。サイクル条件は、95°C 2 分、その後 95°C 15 秒、63°C 15 秒、72°C 30 秒を 40 サイクルでした。反応容量の 1/5 を 1% アガロース ゲルにロードしました。L: PCRBIO ラダー II。PCRBIO HS Taq DNA ポリメラーゼは、テストした競合他社の製品と同等か、それよりも優れています。

参考データ２：特別なバッファーを必要とせずに、GC リッチ フラグメントの増幅において競合他社を上回ります

開始時のテンプレート量は 5ng のマウスゲノム DNA でした。増幅されたフラグメントは 3 つの異なる遺伝子に属し、GC 含有量に応じて選択されています (GAP800 bp で 49% GC、ATX500 bp で 69% GC および 71% GC の ATX600 bp)。PCRBIO HS Taq Mix Red (紫) および競合他社の対応するホット スタート Taq ミックスは、メーカーの推奨に従って使用されました: NEB (オレンジ、標準形式と GC バッファー形式の両方)、Promega (黄色)、および Thermo (赤)。サイクル条件は、95°C 5 分、その後 95°C 15 秒、60°C 15 秒、72°C 20 秒の 40 サイクルでした。反応容量の 2/5 を 1.2% アガロース ゲルにロードしました。L: PCRBIO Ladder III。

参考データ３：1kb フラグメントの増幅において競合製品を上回っています

マウスゲノム DNA の 10 倍希釈系列 (5000、500、50、5pg) と PCRBIO HS Taq Mix Red (紫) および対応する競合他社のホット スタート Taq ミックスを使用した、GAPDH 遺伝子の 1kb フラグメントの PCR 増幅。反応は、製造元の推奨事項 (NEB (オレンジ)、Promega (黄色)、Thermo (赤)) を使用してセットアップしました。サイクル条件は、95°C 2 分、次に 95°C 15 秒、63°C 15 秒、72°C 30 秒を 40 サイクル (NEB の場合: 94°C 2 分、次に 94°C 15 秒、63°C 15 秒、68°C 30 秒を 40 サイクル) でした。反応容量の 2/5 を 1% アガロース ゲルにロードしました。L: PCRBIO Ladder II。

FAQ

PCRBIO HS Taq DNA Polymerase はマルチプレックス PCR に使用できますか？
当社の PCRBIO HS Taq DNA Polymerase は、低温で Taq ポリメラーゼの活性をブロックするホット スタート テクノロジーを備えているため、マルチプレックス化に特に適しています。アニーリング温度などの反応パラメーターの最適化が必要になる場合があることに注意してください。マルチプレックス PCR を初めて実行する場合、55°C から 65°C のアニーリング温度勾配を実行することをお勧めします。最良の特異性をもたらすアニーリング温度は、その後の実験で使用する必要があります。マルチプレックス PCR には高速サイクリング条件を使用しないでください。最初は 90 秒の伸長時間を推奨しますが、収量を増やすためにこの時間を延長することもできます。マルチプレックス反応の場合、反応は最初から最後まで氷上または冷却ブロック上で行う必要があります。

PCRBIO HS Taq DNA Polymerase はコロニー PCR に使用できますか？
はい。細菌コロニーを使用する場合は、滅菌チップを使用してコロニーを選択し、50 µL の PCR 反応液に再懸濁します。液体培養から作業している場合は、最終混合物に 5 µL の一晩培養液を追加します。一般的なプロトコルに従い、最初の変性時間を 95 °C で 10 分に増やします。

PCRBIO HS Taq DNA Polymerase は血液サンプルからの DNA の増幅に使用できますか？
はい。2 µL の血液サンプルを 50 µL の PCR 反応に使用し、一般的なプロトコルに従ってください。血液成分が PCR 反応を阻害する可能性があることに注意してください。PCR 増幅に最適なテンプレート濃度を見つけるために、サンプルの連続希釈を実行します。

PCRBIO HS Taq DNA Polymerase は校正できますか？
いいえ。PCRBIO HS Taq DNA Polymerase には 5’-3’ エキソヌクレアーゼ活性がありますが、3’-5’ エキソヌクレアーゼ (校正) 活性はありません。

PCRBIO HS Taq DNA Polymerase は PCR 産物に A テールまたは平滑末端を生成しますか？
PCRBIO HS Taq DNA Polymerase で生成された PCR 産物は A テール化されており、TA ベクターへのクローニングに適しています。

アガロースゲル上での Red Mix 色素の見かけの Mw はどれくらいですか？
この非阻害性色素は、ゲルへの直接ローディングを可能にするために添加されており、1% アガロースゲルでは 200 〜 300 bp、2% アガロースゲルでは 50 〜 100 bp の DNA フラグメントと同様の速度で泳動します。異なるアガロース含有量のゲルを泳動すると、この見かけの分子量に変化が見られる場合があります。

PCRBIO Taq DNA Polymerase と PCRBIO HS Taq DNA Polymerase の違いは何ですか？
PCRBIO HS Taq DNA Polymerase は独自の抗体媒介ホットスタート技術を使用していますが、PCRBIO Taq DNA Polymerase にはこの機能がありません。抗体と Taq DNA ポリメラーゼの相互作用により、ホット スタート ステップまで酵素は不活性のままになります。ホット スタートとは、95°C での最初の活性化ステップを指し、その後 DNA ポリメラーゼに結合した抗体を不活性化します。65°C 未満で Taq DNA ポリメラーゼが不活性化されると、プライマーダイマーの形成と非特異的増幅が防止されます。