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試薬・消耗品
p53liver CALUX®
p53liver CALUX®
CALUX® レポーターアッセイ
p53応答性CALUX®は、p53応答要素（p53 REs）に結合したホタルルシフェラーゼ遺伝子を組み込んだヒト肝癌細胞株HepG2を使用したレポーターアッセイです。p53経路を活性化するリガンドの存在を検出し、発光量からその経路活性化の量を測定できます。
仕様
| 仕様 | p53liver CALUX® |
|---|---|
| 基底細胞株 | HepG2 |
| 種 | ヒト |
| 組織 | 肝細胞癌 |
| 陽性対照 | アクチノマイシンD |
| エンドポイント（純粋化合物） | ECまたはPC濃度、最小効果濃度（例：PC10） |
| エンドポイント（混合物） | 毒性当量（pg TEQ/g処理サンプル） |
| テスト期間 | 24時間（インキュベーション時間） |
| 特異性 | p53経路のみを活性化します。リガンドの選択は、化合物クラス選択的検査法および/または代謝モジュールを通じて行うことができます。 |
| アッセイ干渉 | 非常に経路特異性の高いコンストラクトと特異的な受容体コンストラクト、および広範なQA/QCを使用しているため、最小限です。特定のリガンドで稀に発生する細胞毒性および非特異的ルシフェラーゼ干渉は、cytotox CALUX®アッセイで評価できます。 |
| 感度（LOD/Q） | 通常、高pgの範囲（マトリックスとサンプルサイズに依存） |
| マトリックス | あらゆるタイプのサンプル |
| サンプルの体積/質量 | マトリックスおよび所望の（定量限界）LOQに依存 |
| 化合物の量 | 通常は10mg。DMSOで提供される高効力化合物の場合はそれよりずっと低い。 |
| 評価基準 | 関連するアプリケーション/規制に準拠した社内方式。 |
| SOPとガイドライン | BDS内部、ERおよびAR CALUX®アッセイに類似 |
| HTSプロトコル | BDS; EURL‑ECVAM DB‑ALMプロトコル番号197を参照: 自動CALUX®レポーター遺伝子アッセイ手順 |
製品詳細
p53liver CALUX® (BDS 022)
p53応答性CALUX®は、p53応答要素（p53 REs）に結合したホタルルシフェラーゼ遺伝子を組み込んだヒト肝癌細胞株HepG2を使用しています。この細胞株は、p53経路を活性化するリガンドの存在を検出するレポーター遺伝子として機能します。これらの化合物によってp53経路が活性化されると、p53はp53 REsに結合します。これにより、通常p53 REsによって媒介される転写に関連するタンパク質が発現しますが、同時にルシフェラーゼも発現します。適切な基質をルシフェラーゼに追加すると光が放出されます。生成される光の量はリガンド特異的経路活性化の量に比例しており、関連する参照化合物である経路アゴニストのアクチノマイシンDに対してベンチマークされ、毒性等価（TEQ）またはバイオアナリティカル等価（BEQ）として表現されます。
主な参考文献
Budin C, Man HY, Al-Ayoubi C, Puel S, van Vugt-Lussenburg BMA, Brouwer A, Oswald IP, van der Burg B, Soler L. Versicolorin A enhances the genotoxicity of Aflatoxin B1 in human liver cells by inducing the transactivation of the Ah-Receptor. Food Chem Toxicol. 2021 May 10:112258.