IsoFast® Hot Start Bst Polymerase Colour & Mix

IsoFast® Hot Start Bst Color は、IsoFast® Hot Start Bst Polymerase と pH ベースの色素を組み合わせた比色等温増幅酵素配合物で、迅速なポジティブ/ネガティブ スクリーニングを実現します。

IsoFast® Hot Start Bst Polymerase は、Geobacillus stearothermophilus（以前は Bacillus stearothermophilus、Bst として知られていました）DNA ポリメラーゼの大きなフラグメントの組み換えバージョンです。この比色製剤は、サンプルとプライマーを直接入力するための、組み立て済みのミックスである IsoFast® Hot Start Bst Polymerase Color Mix としてもご利用いただけます。また、IsoFast® Hot Start Bst Polymerase Color は、Bst DNA ポリメラーゼとカラー バッファーの別個のシステムとしてもご利用いただけます。これにより、アッセイの完全なカスタマイズと最大限のセットアップの柔軟性が実現します。この等温増幅システムにより、PCR を使用せず、直接、色に基づいて DNA ターゲットを読み出すことが可能になり、ポイントオブケア診断やフィールドテストに最適です。

特長

• 迅速なポジティブ/ネガティブ スクリーニング
• AptaLock™ ホットスタートによる DNA ターゲットの超高感度検出
• 迅速な重合により、結果が出るまでの時間が短縮されます（最短 10 分）
• 1μL あたり 3 つのターゲットコピーまで検出
• 低温と室温の両方のセットアップに最適
• ターゲットの早期検出のための速度と感度の向上
• 55 ～ 70 ℃ の幅広い温度で高い活性を発揮

アプリケーション

• 比色等温増幅
• 比色ループ介在等温増幅 (LAMP)
• DNA 陽性/陰性検査
• 迅速なターゲットスクリーニング
• ポイントオブケア検査

IsoFast® Hot Start Bst Polymerase & Mixes とは？

IsoFast® Hot Start Bst Polymerase Color および IsoFast® Hot Start Bst Polymerase Color Mix は、等温増幅技術の最新かつ改良された開発であり、分子診断および研究の要求を満たすために DNA 増幅プロセスにおいて比類のない特異性と速度を実現するように設計されています。ループ介在等温増幅 (LAMP) またはその他の等温増幅法のいずれを使用する場合でも、これらの IsoFast® Hot Start Bst Color は、優れた感度と信頼性を保証します。当社のミックスは、Hot Start Bst DNA Polymerase 酵素の力を活用し、バックグラウンド増幅を最小限に抑え、ターゲット特異性を最大限に高めます。IsoFast® Hot Start を使用すると、等温増幅実験がこれまで以上に高速、効率的、かつ簡単になり、診断アプリケーションと研究の両方で分子生物学技術の新しい基準を確立します。

ホット スタートは、非特異的増幅や偽陽性結果の防止に役立つため、等温増幅技術において重要です。ループ介在等温増幅 (LAMP) などの等温増幅法では、特定のプライマーと酵素を使用して、通常 60℃ ～ 65℃ の一定温度でターゲット配列を増幅します。これらの技術は、分子診断や病原体検出などのさまざまな用途で広く使用されています。

等温増幅においてホットスタートが重要なのはなぜですか?

Bst ポリメラーゼ等温反応における非特異的増幅の防止

等温増幅では、増幅プロセスが特定の目的の配列のみをターゲットにしていることを確認することが重要です。非特異的増幅は、プライマーがテンプレートの意図しない領域に結合した場合、または増幅酵素が途中で増幅を開始した場合に発生する可能性があります。ホット スタート技術では、反応が目的の温度に達するまで増幅反応を抑制します。これにより、温度が最適な増幅温度を下回っている反応の初期段階で非特異的産物が形成されるのを防ぎます。

Bst ポリメラーゼ等温増幅特異性の向上

ホットスタート法は、早期の増幅を防止することにより、等温増幅反応の特異性を高めます。つまり、反応によって非ターゲット配列が増幅される可能性が低くなり、偽陽性の結果のリスクが軽減されます。

Bst ポリメラーゼによる等温増幅感度の改善

ホット スタート技術は、等温増幅アッセイの感度も向上させます。非特異的増幅を最小限に抑えることで、利用可能な試薬の多くがターゲット シーケンスの増幅に確保され、反応の効率と検出限界が向上します。

参考データ１：常温設定で結果が出るまでの時間が短縮

IsoFast® Hot Start Bst Mix、IsoFast® Bst Mix、および NEB WarmStart LAMP キットを使用した、M13 バクテリオファージゲノムのスキャフォールドタンパク質遺伝子のターゲット配列の等温増幅。プライマーミックスは、F3 および B3 プライマーの場合は 0.2 μM、FIP および BIP プライマーの場合は 1.6 μM、LoopF​​ および LoopB プライマーの場合は 0.8 μM で構成されていました。総反応容量は 25 μL でした。M13 ssDNA ゲノムの 8 段階希釈を使用しました。0.5 ng/μL のストックから開始し、プロットに示されているゲノム コピー数に対応する 10 の希釈係数を使用しました。反応マスターミックスとプレートは、室温（周囲温度設定）で約 20 分間準備しました。反応は 65 ℃ で 100 分間実行しました。BioRad CFX96 Touch を使用して、10 秒ごとに蛍光を記録しました。しきい値までの時間は、同じ蛍光しきい値に到達するまでに必要な時間を示します。

IsoFast® Hot Start Bst Mix は、常温設定下では、IsoFast® Bst Mix や NEB WarmStart LAMP Kit と比較して増幅が速いことが示されています。

参考データ２：冷温および常温反応設定による信頼性の高い比色測定

IsoFast® Hot Start Bst Polymerase または 10x IsoFast® Color Buffer A 中の IsoFast® Bst Polymerase、および NEB WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mix を使用した、M13 バクテリオファージ ゲノムの足場タンパク質遺伝子の標的配列の等温増幅。プライマー ミックスは、F3 および B3 プライマーの場合は 0.2 μM、FIP および BIP プライマーの場合は 1.6 μM、LoopF​​ および LoopB プライマーの場合は 0.8 μM で構成されていました。総反応容量は 25 μL でした。M13 ssDNA ゲノムの 8 段階希釈液を使用しました。最初は 0.5 ng/μL のストックから始めて、プレートの横に示されているゲノム コピー数に対応する 10 倍の希釈係数を使用しました。反応マスター ミックスとプレートは、コールド ブロック（コールド セットアップ）または室温（常温温度セットアップ）で約 20 分間準備しました。反応は 65 ℃ で 30 分間実行されました。その後、実行終了時に得られた色を示すためにプレートの写真が撮影されました。IsoFast® Bst Polymerase と IsoFast® Hot Start Bst Polymerase は、コールド セットアップで NEB WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mix と比較して優れた感度を示しました。

IsoFast® Hot Start Bst Polymerase を使用すると、常温設定でも陽性のスクリーニングが簡単に行えます。

FAQs

IsoFast® Hot Start Bst で増幅した生成物を、クローニングやシーケンシングなどの下流アプリケーションで使用できますか？

等温増幅戦略の特定のタイプは、NGS の RCA（ローリング サークル増幅）​​ や WGA（全ゲノム増幅）などの下流アプリケーションに適しています。このタイプの増幅には、IsoFast® Hot Start Bst を使用できます。ただし、最も一般的な等温増幅タイプである LAMP では、複数の種類の DNA 産物が生成されるため、クローニングには適さず、NGS アプリケーションには実用的ではありません。

IsoFast® Hot Start Bst ではどのような種類の核酸を増幅できますか？

IsoFast® Hot Start Bst Polymerase、IsoFast® Hot Start Bst Mix、IsoFast® Hot Start Bst Colour Mix、および IsoFast® Hot Start Bst Polymerase Colour はすべて、DNA および cDNA ターゲットの増幅用に設計されています。これらは RNA ターゲットの直接増幅には適していません。RNA ターゲットを増幅するには、直接 1 ステップ等温増幅を行う IsoFast® Bst 1-Step Mix の使用をお勧めします。または、RNA を UltraScript® 試薬の 1 つを使用して cDNA に変換し、その後、ユーザーの好みの IsoFast® Hot Start Bst 試薬で cDNA を増幅する 2 ステップ形式をお勧めします。