IsoFast® Bst Polymerase

IsoFast® Bst Polymerase は、5′-3′ ポリメラーゼ活性と鎖置換活性を含む、Bst DNA ポリメラーゼの大きなフラグメントの組換え型です。この酵素は、高速増幅と強力な鎖置換機能を備えているため、全ゲノム増幅、多重置換増幅、等温増幅などの核酸増幅法に最適です。

IsoFast® Bst Polymerase とは？

IsoFast® Bst Polymerase は大腸菌で発現される組換えタンパク質で、Geobacillus stearothermophilus（以前は Bacillus stearothermophilus として知られていた）DNA ポリメラーゼの大きなフラグメントに相当します。タンパク質のこの部分は DNA の 5′-3′ 合成を触媒し、鎖置換活性を持っていますが、5′-3′ エキソヌクレアーゼドメインを含みません[1]。

[1] Mead DA, McClary JA, Luckey JA, Kostichka AJ, Witney FR, Smith LM. Bst DNA polymerase permits rapid sequence analysis from nanogram amounts of template. Biotechniques. 1991 Jul;11(1):76-8, 80, 82-87.

強力なストランド変位

鎖置換とは、下流で遭遇する二本鎖鋳型 DNA の水素結合を解離する酵素の能力を指し、相補鎖が合成される際に基本的に DNA を解離します。IsoFast® Bst Polymerase は強力な鎖置換活性を示し、全ゲノム増幅、多重置換増幅、等温増幅などの増幅法に適しています。DNA 合成は一定温度で実行されるため、65 ℃ で反応を実行することをお勧めします。ただし、IsoFast® Bst Polymerase は広い温度範囲（55 ℃ ～ 70 ℃、参考データ１を参照）で良好に機能し、プライマーのアニーリングと鎖置換を最適化するために幅広い反応条件を提供します。酵素は 80 ℃ で熱不活性化されます。

迅速で一貫性のある結果

高速増幅を目的として設計された IsoFast® Bst Polymerase は、さまざまな標的配列にわたって迅速かつ一貫した結果をもたらします（参考データ３を参照）。この酵素には高度な 2 部構成のバッファーシステムが搭載されており、困難な条件下でも高い収量とパフォーマンスが保証されます。増幅は、リアルタイム蛍光検出やエンドポイントの視覚化など、さまざまな方法で検出できます。

柔軟なフォーマット

さらなる利便性のために、酵素は別個の蛍光色素（任意の qPCR サーマルサイクラーでのリアルタイム検出を可能にする）とともに利用可能であり、セットアップ時間の短縮を求める場合には 2x ミックス形式で利用できます。酵素は、選択した形式に関係なく、一貫した結果をもたらします（参考データ２を参照）。この製品は PCR には適していません。

参考データ１：広い温度範囲で活性

M13 ゲノムを使用した足場タンパク質遺伝子の等温増幅は、反応を 55 ˚C ～ 70.1 ˚C の間でインキュベートすることで成功しました。

参考データ２：柔軟なフォーマットにより一貫した結果を得られる

2x IsoFast Bst Mix または 10x IsoFast Bst ポリメラーゼのいずれを使用しても、M13 ゲノムを使用した足場タンパク質遺伝子の等温増幅に違いは観察されませんでした。

参考データ３：さまざまなテンプレートにわたって、迅速かつ一貫した増幅パフォーマンスを実現

IsoFast® Bst Mix、NEB WarmStart® LAMP Kit、および NEB Bst 2.0 DNA ポリメラーゼを使用した 3 つのターゲットの等温増幅。メーカーのプロトコールに従って反応混合物を設定しました。プライマーミックスは、F3 および B3 プライマーの場合は 0.2 μM、FIP および BIP プライマーの場合は 1.6 μM、LoopF および LoopB プライマーの場合は 0.8 μM で構成されています。総反応容量は 25 μL です。示されたコピー数に対応して、テンプレートの 7 段階希釈を使用しました（足場タンパク質遺伝子の場合は 8）。反応は 65 ℃ で 100 分間実行されました。BioRad CFX96 Touch を使用して、10 秒ごとに蛍光を記録しました。結果が得られるまでの時間は、同じ蛍光しきい値に到達するのに必要な時間です。IsoFast® Bst Mix は、大手メーカーの製品と比較して、さまざまなテンプレートにわたって高速増幅と一貫したパフォーマンスを示します。