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試薬・消耗品
DR CALUX®
BDS 001
CALUX® レポーターアッセイ
ダイオキシン（PCDDs）およびダイオキシン様化合物（PCDFs・dl-PCBs 等）を検出するレポーター遺伝子アッセイ。ダイオキシン応答要素（DRE）と結合したホタルルシフェラーゼ遺伝子を組み込んだラット肝細胞株 H4IIE を用い、発光量から毒性当量（TEQ／BEQ）として評価します。
仕様
| 仕様 | DR CALUX® |
|---|---|
| 基底細胞株 | H4IIE |
| 種 | ラット |
| 組織 | 肝細胞癌 |
| 陽性対照 | 2,3,7,8-TCDD |
| エンドポイント（純粋化合物） | EC または PC 濃度、最小効果濃度（例：PC10） |
| エンドポイント（混合物） | 毒性当量（pg TEQ/g 処理サンプル） |
| テスト期間 | 24 時間（インキュベーション時間） |
| 特異性 | 選択的硫酸処理法により、通常は非常に安定したダイオキシン様化合物のみが AhR に結合します。リガンドの選択は、化合物クラスの選択的処理法および／または代謝モジュールによって行えます。 |
| アッセイ干渉 | 経路特異性の高い構成と広範な QA/QC を使用しているため最小限です。混合物中のダイオキシン TEQ 評価では、サンプルを硫酸処理で浄化し、dl-PCB を PCDD/F から分離する追加手順を実行します。細胞毒性はチェックされますが、まれにしか発生しません。 |
| 感度（LOD/Q） | 通常 pg の範囲（マトリックスとサンプルサイズに依存） |
| マトリックス | あらゆるタイプのサンプル |
| サンプルの体積／質量 | マトリックスおよび所望の定量限界（LOQ）に依存 |
| 化合物の量 | 通常は 10 mg。DMSO で提供される高効力化合物の場合はそれよりずっと低くなります。 |
| 評価基準 | 関連するアプリケーション／規制に準拠した社内方式。 |
| SOP とガイドライン | BDS 内部および EC 委員会規則 (EU) No 644/2017、同 No 771/2017、NL-SPECIE-07（オランダ、Rijkswaterstaat）、EPA-4435（米国）、JIS ガイドライン 463（日本）、TA-2085/2005（ノルウェー）、EURL-ECVAM 法 DB-ALM プロトコル番号 197（自動化 CALUX® レポーター遺伝子アッセイ手順）。 |
| 主な参考文献 | Garrison PM, Tullis K, Aarts JM, Brouwer A, Giesy JP, Denison MS (1996) Species-specific recombinant cell lines as bioassay systems for the detection of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin-like chemicals. Fundam Appl Toxicol. 30:194-203. / Van Vugt-Lussenburg et al. (2013) DR CALUX®: A high-throughput screening assay for the detection of dioxin and dioxin-like compounds in food and feed. In "High-throughput screening methods in toxicity testing" (P. Steinberg, ed). John Wiley and Sons, Inc. New York. ISBN 9781118065631 |
製品詳細
ダイオキシン応答性（DR）CALUX® は、ダイオキシン（PCDDs）およびダイオキシン様化合物（フラン類（PCDFs）やダイオキシン様 PCB（dl-PCBs）など）の存在を検出するためのレポーター遺伝子として、ダイオキシン応答要素（DREs）と結合したホタルルシフェラーゼ遺伝子を組み込んだラット肝細胞株 H4IIE で構成されています。これらの化合物が細胞内のアリール炭化水素受容体（AhR）に結合すると、リガンド−受容体複合体が DRE に結合します。これにより、通常 DRE を介した転写に関連するタンパク質の発現が引き起こされると同時に、ルシフェラーゼも発現します。ルシフェラーゼの適切な基質を添加すると光が放出されます。生成された光の量はリガンド特異的受容体活性化の量に比例し、標準化合物 2,3,7,8-TCDD と比較され、毒性当量（TEQ）または生物分析当量（BEQ）として表されます。