Clara® Probe 1-Step Purple Mix

Clara® Probe 1-Step Purple Mix は、最大限の感度と使いやすさを兼ね備えた、慎重にバランスがとられた 4x RT-qPCR ミックスで、合理化された 1 ステップ プローブ RT-qPCR ワークフローを実現します。その結果、このミックスは DNA または RNA の増幅効率を低下させることなく、別々の qPCR 試薬を必要とせずに両方のタイプのターゲットを検出するユーザーに最適です。

アプリケーション

遺伝子発現解析、ジェノタイピング、体外診断キットの開発、単一および多重 RNA と DNA 検出。

明確な結果、信頼性の高い結論

Clara® Probe 1-Step Purple Mix は、診断アプリケーションや基礎研究において、最高の感度、信頼性、使いやすさを備えた qPCR および 1 ステップ RT-qPCR を実現します。これは、TaqMan、Scorpions®、モレキュラービーコンなど、あらゆる種類のプローブ技術に適したユニバーサル qPCR ミックスです。これは、DNA ポリメラーゼと逆転写酵素の両方が同じマスターミックスに含まれている、PCR BioSystems 社の第一世代のオールインワン 1 ステップ RT-qPCR ミックスです。Clara® Probe 1-Step Purple Mix は、PCR Biosystems 社独自のホット スタート Taq DNA ポリメラーゼと、高性能で耐熱性のある UltraScript® 逆転写酵素の特別に改良されたバージョンを搭載しています。開発中に厳密なテストを行った結果、このミックスは、1 つのターゲットを検出する場合でも、同時に複数のターゲットを検出する場合でも、高効率で高感度な検出で、単一検出と多重検出の両方に非常に適しています。

このミックスは、融解曲線分析（ハイブリダイゼーション プローブのみ）にも適しており、パッシブリファレンス色素なし（No-Rox）またはパッシブリファレンス色素あり（Lo-ROX、Hi-Rox、Separate-ROX、AquaPlex 配合）でご利用いただけます。qPCR 選択ツールを使用して、どの ROX バリアントがお使いの機器と互換性があるかを確認してください。

視認しやすい紫色色素

Clara® Probe 1-Step Purple Mix は、Clara®試薬ファミリーのスピード、感度、特異性と、サンプルの視覚化を容易にする不活性紫色色素を組み合わせたものです。この染料はプローブ蛍光体の消光を大幅に低減し、qPCR の正確な結果を保証すると同時に、取り扱いやピペッティングの手間を軽減します。

Clara® Probe 1-Step Purple Mixes のプローブの蛍光強度の減少は次のとおりです。FAM: up to 25%、HEX: up to 30%、Tex: up to 25%、Cy5: up to 10%。パーセンテージは、少なくとも 2 つの異なる反応におけるプラトーの高さの減少（Purple Mix と Basic Mix の比較）を表します。

最高の使いやすさを実現

PCR Biosystems 社独自のバッファー組成（スマート スクリーン技術で識別）と独自に改良された UltraScript® 逆転写酵素により、オールインワンの RT-qPCR マスターミックスとして、ミックスを 1 本のチューブに保存できます。これにより、アッセイのセットアップに必要なピペッティングの回数が減り、汚染のリスクが最小限に抑えられ、時間が節約されます。また、1 つの試薬が DNA と RNA の増幅に適しており、両方のターゲット タイプを同じプレートまたは同じ実行に含めることができることも意味します。ミックスが 1 つあるということは、主に RNA ターゲットを調査しているが DNA 定量化も必要な場合に、別のセットアップが必要ないことを意味します。

両方のターゲット タイプを大量にテストするお客様は、ターゲット タイプごとに専用の試薬を好むかもしれませんが、Clara® Probe Purple Mix は DNA および cDNA プローブベースの検出専用に開発されています。

リアルタイム PCR の信頼性を向上

徹底的な最適化により、このミックスはあらゆるタイプの核酸ターゲットに適しています。SARS-CoV-2、RSV、インフルエンザ A、B などの一般的な RNA ウイルス、g-アクチン や GAPDH などの標準的なハウスキーピング遺伝子、および DNA ターゲットに対してテスト済みです。ミックスに逆転写酵素が含まれていても DNA ターゲットの直接増幅には影響しません。つまり、DNA または RNA 配列の検出で同じ高い効率が得られます。ミックスは非常に安定しており、実行間で高い再現性を示し、データの再現性と実験結果の信頼性を高めます。

1 ステップ qPCR の感度を最大化

Clara® Probe 1-Step Purple Mix の高濃度 4x ミックス形式は、各反応により多くのサンプルを追加し、より少ない反応容量を安心して使用できるため、感度と柔軟性が向上します。高速増幅により Cts が早くなり、20 μL 反応あたり 4 つのターゲット コピー（μL あたり 0.8 コピー）まで確実に検出できます。最も希薄なサンプルであっても優れた検出を実現します。

プローブベースの qPCR 実験デザインについてお困りですか？

プライマーとプローブは慎重に設計してください。高速サイクリング条件下での効率的な増幅のために、80 bp ～ 200 bp のアンプリコン長をお勧めします。すべてのメーカーのマスター ミックスで、アンプリコン長が短いほど、反応を速くサイクリングできます。アンプリコン長は 400 bp を超えてはなりません。プライマーは、デフォルトの Primer 3 設定を使用した場合、約 60 °C の融解温度が予測されます。TaqMan® プローブの場合、5′ プライマーに近いプローブを選択し、末端グアノシン残基は避けてください。特にマルチプレックス反応では、プローブ色素とクエンチャーの理想的な組み合わせを確保してください。

参考データ１：シングルプレックス反応におけるマウス RNA の高感度検出

マウス RNA によるシングルプレックス感度。Clara® Probe 1-Step Mix を使用したシングルプレックス設定での一般的なハウスキーピング遺伝子（βアクチンおよび β-2-ミクログロブリン [B2M]）の増幅。増幅曲線は左のパネルに、効率は右のパネルに示されています。マウスの全 RNA テンプレートの 5 つの連続希釈液を使用しました。それぞれ 50 ng/µL、5 ng/µl、500 pg/µL、50 pg/µL、5 pg/µL に相当します。総反応容量は 20 µL でした。サイクル条件は、52℃ 5 分、95℃ 3 分、および 95℃ 15 秒、60℃ 30 秒の 60 サイクルでした。Clara® Probe 1-Step Mix は、テンプレートの濃度が低くても、高い感度と再現性のある増幅を示し、最大限の効率を示します。

参考データ２：マルチプレックス設定における信頼性の高いパフォーマンス

Clara® Probe 1-Step Mix（ピンク色のバー）、Thermo Fisher SuperScript III Platinum OneStep qRT-PCR Kit（緑色のバー）、Thermo Fisher TaqPath 1-Step Multiplex Mastermix（青色のバー）、および NEB Luna Universal Probe One-Step RY-qPCT Kit（黄色のバー）を使用した、一般的な冬のウイルス（インフルエンザ A、インフルエンザ B、RS ウイルス、および SARS-CoV-2）のマルチプレックス増幅。Ct 値は上のパネルに、効率は下のパネルに示されています。RNA テンプレートの 5 段階希釈液が使用されました。これは、各ウイルスゲノムの 40,000、4,000、400、40、および 4 コピーに相当します。総反応容量は 20 µL でした。サイクル条件は、52℃ 15 分、95℃ 3 分、95℃ 15 秒、60℃ 30 秒の 50 サイクルでした。Clara® Probe 1-Step Mix は、マルチプレックス設定で最適な効率で、低コピー数のテンプレートでも高感度で再現性の高い増幅を示し、主要な Probe 1-Step Mix の競合製品と同等かそれ以上です。

関連文献：PubMed ／ Google Scholar