Air-Dryable Inhibitor-Tolerant Probe Mixes

PCR Biosystems 社の空気乾燥可能な阻害剤耐性プローブミックスを使用すると、一貫した信頼性の高い結果が得られます。唾液、臨床サンプル、環境サンプル、実験用化学物質など、困難なサンプルの分析用に完璧に設計されています。これらの乾燥可能な試薬は、すべてのリアルタイム機器との互換性を備えており、DNA と RNA の両方の検出のための qPCR を可能にします。空気乾燥可能な阻害剤耐性 qPCR ミックスは、当社の新しい阻害剤耐性化学と最先端の空気乾燥技術を組み合わせたものです。

アプリケーション

• 診断プローブベースのqPCRとRT-qPCR
• DNAとRNAの検出
• TaqMan®、Scorpions®、およびモレキュラービーコンプローブ qPCR
• マルチプレックスおよびシングルプレックスのセットアップ
• 粗唾液 qPCR および RT-qPCR

Air-Dryable Inhibitor-Tolerant Probe Mixes とは？

PCR と qPCR は、さまざまな化合物によって阻害される可能性があります。このような阻害剤は、qPCR ワークフローや診断プロセスに悪影響を与える可能性があります。風乾可能な阻害剤耐性プローブミックスは、Hot start Taq DNA polymerase (1 ステップミックスの場合は RTase および RNase 阻害剤)、緩衝剤、マグネシウム、dNTP、賦形剤のブレンドを含む 4x レディミックスで、活性を失わずに確実に風乾できるため、シングルチューブフォーマットでプローブベースの qPCR を確実に成功させることができます。エンドユーザーは、これらのミックスをプライマー、プローブ、テンプレートと組み合わせて、単一または多重検出を行うことができます。これらのミックスは、TaqMan®、Scorpions®、モレキュラービーコンなどのすべてのプローブ化学と普遍的に互換性があり、すべての市販のリアルタイム PCR 機器と最大限の互換性があります。

さらに、両方のミックスは空気乾燥可能（グリセロールフリー）であるため、標準的な実験室用オーブンで乾燥させて、活性を失わずに室温で長期保存することができます。迅速な空気乾燥用に設計された Air-Dryable Inhibitor-Tolerant Probe (1-Step) Mixes は、体外診断キット開発 (IVD) での使用を目的としていますが、乾燥 (RT-) qPCR 反応の利点を享受したいと考える人にも使用できます。空気乾燥プロトコルに必要な時間と専門知識は、フリーズドライ (凍結乾燥) に比べて大幅に少なく、非常に簡単な装置です。5 μL の 4x Air-Dryable Inhibitor-Tolerant Probe (1-Step) Mixes (最終反応量 20 μL に必要) は、標準的な実験室用オーブンを使用して、わずか 80〜90 分で乾燥してゲルにすることができます。

これらのミックスはどのような種類のテンプレートに適していますか？

プローブミックスは DNA テンプレートの増幅に適しています。ワンステップミックスは、テンプレートの種類に関係なく、効率を損なうことなく DNA サンプルと RNA サンプルの両方を増幅するために使用できます。

Air-Dryable Inhibitor-Tolerant Probe Mixes が許容する阻害剤の種類

プローブとプローブ 1 ステップ qPCR ミックスは、広範な一般的な PCR 阻害剤に対してテスト済みであり、耐性があります。これには、標準的な実験室化学物質 (SDS、グアニジン、エタノール) や、血液サンプル (ヘミン、ヘマチン、ヘモグロビン、ヘパリン、IgG 免疫グロブリン、ラクトフェリン、クエン酸ナトリウム)、唾液、尿 (尿素)、植物、環境サンプル (フミン酸、カテキン、ケルセチン、タンニン酸、セルロース、クロロフィル) に含まれる生物学的サンプル阻害剤などが含まれますが、これらに限定されません。この混合物は、他の複数の純粋な化学阻害剤とともに、粗製 (または希釈された) 唾液および血液に対して広範囲に検証されています。

空気乾燥の主なメリット

• 反応混合物の体積と質量が削減されるため、輸送と保管のコストが安くなります
• 空気乾燥した最終ゲルは室温で安定しているため、コールドチェーン輸送や保管の必要がなくなります。これにより物流が簡素化され、全体的なコストが削減されます
• 使用できるサンプル量を増やすことができます。サンプル投入量は最終反応量と等しくなります。これは、ターゲットコピー数が少ない希釈サンプルに最適です。
• オーブンでの自然乾燥は、専門的な機器や知識を必要としないため、非常に利用しやすい方法であり、追加のスタッフやプロジェクトの外注の必要がありません。
• 中小規模の IVD キット開発者向けの乾燥プロセスと最終製品開発の制御の向上

参考データ１：37℃で12週間後の乾燥ミックスの安定性

3 つの RNA ターゲット、B2M (β-マイクロチューブリン)、γ-アクチン、および GAPDH を、Air-Dryable Inhibitor-Tolerant Probe 1-Step Mixes を使用したシングルプレックス RT-qPCR 反応で増幅しました。ミックスは乾燥され、-20 °C で保存されました (青い曲線)。または 37 °C で 12 週間インキュベートされました (紫色の曲線)。乾燥前後の反応効率を各グラフの差し込み図として示します。マウス RNA の 1.25 ng/μL、125 pg/μL、12.5 pg/μL、および 1.25 pg/μL の 4 つの段階希釈を使用しました。サイクル条件は、45 °C で 20 分間、95 °C で 2 分間、その後 95 °C で 10 秒、60 °C で 30 秒を 54 サイクルでした。

参考データ２：ヒト唾液の有無による 4 重 RNA 検出における競合他社との比較

4 つの RNA ターゲット、SARS-CoV-2 E 遺伝子 (E 遺伝子)、呼吸器合胞体ウイルス (RSV)、インフルエンザ A (INF-A)、インフルエンザ B (INF-B) が、乾燥および再構成後の Air-Dryable Inhibitor-Tolerant Probe 1-Step Mix または Meridian Air-Dryable Direct RNA/DNA qPCR Saliva を使用したマルチプレックス 1 ステップ RT-qPCR 反応で、ヒト唾液あり (下段) およびなし (上段) で増幅されました。各ターゲットについて 3 つの技術的複製を含む 4 つのテンプレート希釈 (4000、400、40、および 4 コピー) を 20 μL 反応で使用しました。唾液を使用した反応には、汎用輸送培地で 1/10 に希釈された 5 μL の唾液が含まれ、これは反応あたり 2.5% のヒト唾液に相当します。Air-Dryable Inhibitor-Tolerant Probe 1-Step Mix は、唾液がない場合には Meridian Air-Dryable Direct RNA/DNA qPCR Saliva と同等であり、2.5% のヒト唾液がある場合には Meridian を大幅に上回ります。

参考データ３：ヒト唾液存在下での三重鎖 DNA 検出における競合他社との比較

サル痘 MPX ウイルスの異なる株に対応する 3 つの DNA ターゲット。GEN (一般的な MPX 株)、CB (コンゴ盆地変異体)、WA (西アフリカ変異体) は、Air-Dryable Inhibitor-Tolerant Probe 1-Step Mix または Meridian Air-Dryable Direct RNA/DNA qPCR Saliva (乾燥前) を使用して、ヒト唾液存在下で増幅されました。各ターゲットに対して 3 つの技術的複製を含む 4 つのテンプレート希釈度 (10,000、1,000、100、および 10 ウイルス DNA コピー) が、20 µL 反応で使用されました。唾液を使用した反応には、汎用輸送培地で 1/10 に希釈された 5 µL の唾液が含まれ、これは反応あたり 2.5% のヒト唾液に相当します。サイクル条件は、95℃で3分、続いて95℃で10秒、60℃で20秒を50サイクルでした。Air-Dryable Inhibitor-Tolerant Probe 1-Step Mix は、2.5%のヒト唾液が存在するMeridian Air-Dryable Direct RNA/DNA qPCR Saliva と一致します。

参考データ４：唾液の存在下でも乾燥後は確実な性能を発揮

4 つの RNA ターゲット、SARS-CoV-2 E 遺伝子 (E 遺伝子)、呼吸器合胞体ウイルス (RSV)、インフルエンザ A (INF-A)、インフルエンザ B (INF-B) を、乾燥前 (青い曲線) と乾燥後 (40 °C で 80 分) (紫色の曲線) の Air-Dryable Inhibitor-Tolerant Probe 1-Step Mix を使用したマルチプレックス 1 ステップ RT-qPCR 反応で、ヒト唾液を用いて増幅しました。各ターゲットに対して 3 つの技術的複製を含む 4 つのテンプレート希釈度 (4000、400、40、および 4 コピー) が 20 μL 反応で使用されました。汎用輸送培地で 1/10 に希釈した唾液 5 μL (2.5% のヒト唾液に相当) が反応ごとに追加されました。サイクル条件は、47 °C で 10 分間、95 °C で 2 分間、続いて 95 °C で 10 秒間、60 °C で 30 秒間を 50 サイクルでした。